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怎樣設定培養細胞離心機的離心力

更新時間:2013-04-18      點擊次數:2849

        離心機作為一種手段,具有許多優點。例如,超速離心機可在低溫下操作,保護了生物大分子的活性。制備型的離心機負載量大,一次可分離提純幾克樣品,比層析、電泳上的樣品量大得多。分析離心機不僅可測物質的分子量,還可檢驗物質的純度、構象、沉降系數等。因此離心技術在生物學研究中占有重要的地位,是分離、純化細胞、病毒、蛋白、核酸和酶的zui方便zui有效的工具。

離心機是借離心力分離液相非均一體系的設備。根據物質的沉降系數、質量、密度等的不同,應用強大的離心力使物質分離、濃縮和提純的方法稱為離心。一般說,離心機轉速在20 000r/min以上的稱為超速離心機。離心技術,特別是超速離心技術是分子生物學、生物化學研究和工業生產中*的手段。

  用離心方法分離生物大分子和亞細胞物質的基本原理是根據它們在液體介質中或者沉降速度不同而形成不同的區帶,或者它們的密度不同而停留在液體介質中不同的位置而把它們一一分開。前者是沉降速度法,應用該法時液體介質的zui大密度要小于樣品中zui小顆粒的密度,離心時選用高轉速和短時間;后者是沉降平衡法,應用該法時液體介質的zui大密度要大于樣品中zui小顆粒的密度,離心時選用較低轉速和較長時間。實際操作有幾種形式:

  1.差速離心 這種方法是選擇不同轉速的離心,分別分離各個不同組分。例如先用低速沉降大顆粒和上清液,在高速離心上清沉降中等顆粒,zui后超速離心上清沉降小顆粒。采用逐級提高離心力分離上情液的方法,把不同大小的顆粒分開。

這種方法比較簡單,方便。分離的組份沉到管底,因此可以迅速濃縮所要的組份,減少體積。但回收率和純度是有矛盾的,要提高回收率,勢必提高轉速或延長離心時間,這樣大小相近的顆粒也會沉到管底。因此該法多用于粗提純或初步濃縮樣品。

  2.速度區帶(或速度梯度)離心 本法是將樣品放在一個連續的密度梯度液體上,通過離心,大顆粒沉降快,小顆粒沉降慢。經過一段時間,相同的顆粒就在同一深度形成一條帶子,因此把各種組份分開來。它適用于分離密度相同、而大小不同的物質,如不同的蛋白質組份密度都差不多,但分子量不一樣,用本法很容易將其分開。但對密度不同、大小類似的物質則不易分離。

  蔗糖梯度是一種常用的介質。用不同濃度的蔗糖溶液(5%-60%)配成梯度,用于梯度離心。再分別進行收集處于不同區帶里的各個組份。

 

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